Acid Test de Detección – Gonorrea – STD Información de los CDC, los resultados de pruebas de gonorrea.

Acid Test de Detección - Gonorrea - STD Información de los CDC, los resultados de pruebas de gonorrea.

Principio

Pruebas de detección rápida de ácido

Un ejemplo de una prueba de detección rápida de ácido es QuadFERM +, que se muestra en la Figura 1. QuadFERM + es una tira de plástico compuesto por una cúpula que contiene un control y cúpulas que contienen sustratos de hidratos de carbono para detectar la producción de ácido a partir de glucosa, maltosa, lactosa y sacarosa medio libre de hidratos de carbono . QuadFERM + también incluye otras pruebas diferenciales – desoxirribonucleasa, ADNasa, y pruebas de la beta-lactamasa – para Neisseria y especies relacionadas. Los organismos que producen ácido de los carbohidratos producirán ácido suficiente para sobrepasar la capacidad tampón del medio de sustrato y causar un cambio de color de rojo (alcalino) a amarillo (ácido), por ejemplo Figura 1 .

REQUISITOS DE LA MUESTRA

espécimen óptimo: cultivo puro aislado medio (18 h-24 h.) de bacterias gram-negativas, oxidasa, catalasa positiva diplococos positivo crecido en no selectivo (chocoate o equivalente) ya sea desde un selectiva (Modificado de Thayer-Martin; MTM) medio o un no selectivo (chocolate o equivalente) media.

  • cultivos contaminados cultivan en medio no selectivo
  • culturas Aparentemente puros cultivan en medio selectivo
  • Los cultivos puros mayores de 18 h-24 h. crecido en medio no selectivo

Los factores que comprometen los resultados de las pruebas:

  • El uso de cultivos contaminados inocular prueba.
  • La incubación de las pruebas en una incubadora con atmósfera de dióxido de carbono suplementada. El dióxido de carbono puede difundir en el medio y formar ácido carbónico que puede causar una reacción de ácido de falsos positivos.

Estabilidad del inóculo:

  • La producción de ácido en esta prueba depende de enzimas preformados. Los medios se inocularon dentro de los 30 min. de la eliminación de la cultura de la incubadora; la exposición prolongada a temperatura ambiente puede resultar en la actividad de la enzima disminuida.

Medio / Reactivos

QuadFERM +: prueba de detección de ácido comercial (por glucosa, maltosa, sacarosa y lactosa) que incluye una prueba de DNasa y beta-lactamasa.

Conservar de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Procedimiento de Control de Calidad / Prueba

Las cepas de CC:

  • N. gonorrhoeae. ATCC 31426 cepa
  • N. lactamica. ATCC 23971 cepa
  • M. catarrhalis. ATCC 25240 cepa
  • N. mucosa. ATCC 19695 cepa

cepas de control de calidad se almacenan a -70ºC en una solución de caldo de soja trypic que contiene 20% de glicerol. Las reacciones de las cepas de CC deben ser confirmados en el momento de las existencias congeladas se preparan. cepas de control de calidad se pueden almacenar a -70ºC durante 2 años.

  1. viales descongelación de las cepas de CC se almacenaron a -70ºC. aislados clínicos pueden ser subcultivadas de medio selectivo o subculturas purificados.
  2. Raya-inocular cepas en placas de agar chocolate (o medio equivalente) para el aislamiento. Incubar las placas a 35ºC-36.5C en un ambiente enriquecido en dióxido de carbono (5%) durante 18 a 24 h. Confirman que las culturas son pura.

Realizar las pruebas como se describe en las instrucciones del fabricante. Rojo de fenol se utiliza como indicador de pH en la mayoría de los productos. Un color anaranjado-rojo es negativo; un color amarillo es positivo.

reacción positiva se registra cuando el color en el medio de ensayo es más naranja / amarillo que el color en el medio de control.

reacción negativa se registra cuando el color en el medio de ensayo es el mismo, o un rojo más oscuro, que el color en el medio de control.

  • Leer y registrar los resultados. Los resultados para las cepas de control de calidad se muestran en la Tabla 1.
  • Para identificar las cepas de prueba, comparar los patrones de reacción de la cepa de prueba con los que figuran en el prospecto del producto.
  • Nota: Debido a que varios Neisseria especies pueden dar los mismos patrones de detección de ácido (Tabla 2), puede ser necesario para llevar a cabo pruebas adicionales para confirmar la identidad de la cepa de prueba.

    Tabla 1. los patrones de producción de ácido de cepas de referencia de control de calidad de N. gonorrhoeae. N. lactamica. N. mucosa. y M. catarrhalis

    Patrón de reacción de ácido

    Esta sección contiene algunas sugerencias para qué los resultados exactos de la prueba no pueden ser obtenidos en las pruebas de detección de ácido junto con algunas explicaciones y soluciones para estos problemas.

    Todas las pruebas son el ácido. Hacer pruebas de seguro se incuban en una atmósfera sin atmósfera de dióxido de carbono suplementario. El dióxido de carbono puede disolver en el medio, formar ácido carbónico, y causar una reacción ácida en los medios de comunicación.

    resultados de las pruebas débiles. Las pruebas se deben calentar a temperatura ambiente antes de su uso; pruebas se basan en enzimas preformadas. La inoculación de las tiras de prueba en frío puede reducir la actividad de las enzimas.

    resultados incorrectos. USE ONLY cultivos puros. Los cultivos mixtos pueden incluir organismos que producen ácido a partir de hidratos de carbono diferentes de las de la cepa de Neisseria de prueba.

    Resultados débiles o incorrectas. Se inoculan suspensiones bacterianas inmediatamente (dentro de 15 minutos después de su preparación a partir de cultivos puros que se han celebrado en no más de 30 minutos la temperatura ambiente..) Después de la preparación: Las enzimas pueden desnaturalizarse si suspensiones no se utilizan inmediatamente. Si son muchas cepas a ensayar, inocular la tira reactiva inmediatamente después de la preparación de la suspensión en lugar de preparar todas las suspensiones y después de inocular las pruebas; esta estrategia inoculación también minimizará la posibilidad de mislabeling una tira de prueba.

    pruebas de la producción de ácido no se pueden utilizar para identificar todas Neisseria y especies afines cepas aisladas de cualquiera de los dos medios selectivos o no selectivos. Los problemas se han asociado con la identificación de estas especies en las pruebas de detección de ácido por dos razones.

    Varias especies exhiben los patrones de producción misma de ácido

    Algunas cepas pueden exhibir patrones aberrantes de ácido; Estas especies incluyen N. meningitidis (variantes de maltosa-negativo), N. cinerea (Overoxidizes ácido producido a partir de glucosa, pero pueden mostrar una reacción ácido débil debido a la formación de ácido carbónico), y N. lactamica (Variante de la lactosa-negativas [muy raro]).

    Por lo tanto, con la excepción de N. lactamica cepas que producen ácido a partir de glucosa, maltosa, y lactosa, pruebas adicionales se deben realizar antes de que una identificación CONFIRMAR / definitivo se puede informar.

    Ejemplos de pruebas adicionales que se pueden usar para diferenciar entre especies que exhiben patrones de producción de ácido similares se muestran en las Tablas 3, 4, 5, y 6.

    Tabla 3. En las pruebas complementarias que permiten la diferenciación entre los diplococos gram-negativos que producen ácido sólo de la glucosa.

    Las especies que producen ácido
    Sólo a partir de la glucosa

    abreviaturas: GND, diplococos Gram-negativas; GNR, bacilo Gram-negativas; +, La mayoría de las cepas positivas; -, La mayoría de las cepas negativas; R, cepas crecen bien en medio selectivo para N. gonorrhoeae y / o no muestran inhibición alrededor de un disco de colistina (10 microgramos); (R), la mayoría de las cepas susceptibles, algunas cepas conocidas por ser resistentes; S, la mayoría de las cepas sensibles, no hay cepas conocidas para que sea resistente.

    Aunque las pruebas de sustrato de la enzima están destinados para ser utilizado sólo para la identificación de Neisseria spp. aislado en medios selectivos para N. gonorrhoeae. estas pruebas proporcionan información adicional que puede ayudar en la identificación precisa de un aislado. Sin embargo, estas pruebas no deben utilizarse como la prueba de identificación primaria para las cepas aisladas en medios no selectivos.

    Tabla 4. En las pruebas complementarias que permiten la diferenciación entre los diplococos gram-negativos que producen ácido a partir de glucosa y maltosa.

    Las especies que producen ácido
    a partir de glucosa y maltosa

    N. subflava
    subflava biovar
    flava biovar

    abreviaturas: GND, diplococos Gram-negativas; GNR, bacilo Gram-negativas; +, La mayoría de las cepas positivas; -, La mayoría de las cepas negativas; R, cepas crecen bien en medio selectivo para N. gonorrhoeae y / o no muestran inhibición alrededor de un disco de colistina (10 microgramos); (R), la mayoría de las cepas susceptibles, algunas cepas conocidas por ser resistentes; S, la mayoría de las cepas sensibles, no hay cepas conocidas para que sea resistente.

    Aunque las pruebas de sustrato de la enzima están destinados para ser utilizado sólo para la identificación de Neisseria spp. aislado en medios selectivos para N. gonorrhoeae. estas pruebas proporcionan información adicional que puede ayudar en la identificación precisa de un aislado. Sin embargo, estas pruebas no deben utilizarse como la prueba de identificación primaria para las cepas aisladas en medios no selectivos.

    Tabla 5. En las pruebas complementarias que permiten la diferenciación entre los diplococos gram-negativa que no producen ácido detectables a partir de los hidratos de carbono.

    Las especies que no producen ácido detectable

    (Glucosa-negativo N. gonorrhoeae )

    Tensión
    variable
    (1+ a 4+)

    abreviaturas: GND, diplococos Gram-negativas; GNR, bacilo Gram-negativas; +, La mayoría de las cepas positivas; -, La mayoría de las cepas negativas; R, cepas crecen bien en medio selectivo para N. gonorrhoeae y / o no muestran inhibición alrededor de un disco de colistina (10 microgramos); (R), la mayoría de las cepas susceptibles, algunas cepas conocidas por ser resistentes; S, la mayoría de las cepas sensibles, no hay cepas conocidas para que sea resistente.

    Aunque las pruebas de sustrato de la enzima están destinados para ser utilizado sólo para la identificación de Neisseria spp. aislado en medios selectivos para N. gonorrhoeae. estas pruebas proporcionan información adicional que puede ayudar en la identificación precisa de un aislado. Sin embargo, estas pruebas no deben utilizarse como la prueba de identificación primaria para las cepas aisladas en medios no selectivos.

    Tabla 6. pruebas complementarias que permiten la diferenciación entre diplococos gram-negativa que producen ácido a partir de glucosa, maltosa y sacarosa.

    Las especies que producen ácido a partir de glucosa, maltosa y sacarosa

    N. subflava biovar perflava

    No se arruguen,
    adherente

    abreviaturas: +, la mayoría de las cepas positivas; -, La mayoría de las cepas negativo.

    informes

    Los resultados obtenidos en las pruebas de detección de ácido permiten la identificación confirmado / definitivo de algunos Neisseria y especies y la identificación presuntiva de otros relacionados. Con la excepción de denitrificans Kingella. las identificaciones realizadas sobre la base de esta prueba asumen, que los aislados son gram-negativa, diplococos oxidasa-positivo.

    Confirmado / identificación definitiva: de lactamica Neisseria se pueden hacer directamente en la base de los resultados de las pruebas de detección de ácido, independientemente del medio en el que se aislaron las cepas. N. lactamica es el único Neisseria spp. de hombre o animal que produce ácido a partir de la lactosa.

    Otro Neisseria y especies afines pueden dar reacciones similares en las pruebas de detección de ácido. Estas especies incluyen N. gonorrhoeae. Por lo tanto, los resultados de las pruebas de detección de ácido deben ser reportados como Presunto. menos que las pruebas suplementarios (véanse las Tablas 3, 4, 5 y 6 anteriores) se realizan para identificar el aislado con precisión.

    referencias

    Bovre K. familia VIII. Neisseriaceae Prevot. En Krieg NR, ed. Manual de Bacteriología Sistemática, vol. 1. The Williams & Wilkins Co. Baltimore; 1984: 288-309.

    Knapp JS. perspectivas históricas y la identificación de Neisseria y especies relacionadas. Clin Microbiol Rev 1988; 1: 415-431.

    Knapp JS, Rice RJ. Neisseria y Branhamella. En. Murray PR, Baron EJ, Pfaller MA, Tenover FC, Yolken RH, ed. Manual of Clinical Microbiology. 6ª ed. Sociedad Americana de Microbiología, Washington D. C .; 1995: 321-340.

    Vedros NA. I. género Neisseria Trevisan 1885, 105AL. En Krieg NR, ed. Manual de Bergey de Bacteriología Sistemática, vol. 1. The Williams & Wilkins Co. Baltimore; 1984: 290-296.

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